1. 打開試劑盒,對照說明書逐一取出各個試劑,了解各試劑的狀態(tài)和規(guī)格。
2. 通讀說明書,準(zhǔn)備好實驗所需儀器、用具(酶標(biāo)儀/分光光度計;金屬浴/水浴鍋;渦旋振蕩儀;96孔板/1mL比色皿等)。
提示:建議在試驗前通讀一遍說明書,了解實驗注意事項,提前設(shè)置好實驗所需溫度。
3.進(jìn)行樣本采集和存儲。生化試劑盒實驗多數(shù)為酶活測定或含量測定實驗,采集后的樣本建議在-20℃以下低溫保存。
4.按照說明書進(jìn)行樣本前處理,詳細(xì)的樣本處理步驟大家可以參考B站上我們樣本前處理的視頻。
提示:提取后的樣本上清液建議在當(dāng)天使用完,現(xiàn)用現(xiàn)配(反復(fù)凍融會影響樣本酶活或含量)。
提示:為確保反應(yīng)進(jìn)行,建議按照說明書加樣表依次加入各個試劑,(有些試劑盒加樣順序可能會影響反應(yīng))。
6.依次加入各個試劑后建議充分混勻,以確保顯色反應(yīng)完。
提示:為確保顯色反應(yīng)完,必須保證反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間準(zhǔn)確,注意是否為避光實驗。
7.反應(yīng)結(jié)束后,在酶標(biāo)儀或分光光度計上進(jìn)行測定,并按照說明書計算公式進(jìn)行計算、分析。
提示:反應(yīng)結(jié)束后應(yīng)立即測定,有些試劑盒反應(yīng)結(jié)束后需要在短時間內(nèi)進(jìn)行測定,時間過久可能會影響實驗結(jié)果。
1. 實驗前,建議通讀說明書,了解實驗各個步驟,并挑選2-3個樣本進(jìn)行預(yù)實驗。
2. 實驗前確定使用的儀器用具,如玻璃比色皿/石英比色皿;96孔普通版/96孔UV板/96孔石英板(尤其注意最終反應(yīng)液溶劑是否為有機(jī)試劑,是否可用塑料材質(zhì)的96孔板)。
3. 實驗前按照說明書溶液的配制,將各個試劑進(jìn)行充分溶解,-20℃保存的試劑建議分裝后保存,避免反復(fù)凍融;現(xiàn)配現(xiàn)用的試劑,建議根據(jù)樣本量進(jìn)行計算后配制使用。
4. 如果樣本吸光值超過線性范圍,可以增加樣本量、延長反應(yīng)時間或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定,注意同步修改計算公式。
5. 如需按照蛋白濃度進(jìn)行計算,建議查看說明書注意事項,確定本試劑盒提取的上清液是否可以用于蛋白濃度測定,若提取液中含有蛋白質(zhì)沉淀劑或前處理過程使蛋白變性,需另取樣本測定蛋白濃度。
6. 若樣本量過多,建議分批次進(jìn)行實驗;連續(xù)幾天進(jìn)行測定時,確保試劑、儀器和操作步驟一致,避免儀器和人工誤差。
提示:各個試劑盒因?qū)嶒炘恚瑴y定方法各有差異,建議實驗前認(rèn)真閱讀該試劑盒的注意事項。