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Solarbio 大鼠外周血淋巴細胞分離液

本分離液為Ficoll、羥乙基淀粉550與泛影酸葡jia胺的混合液?？鼓庵苎稍诜蛛x液中分層。離心時，在Ficoll、羥乙基淀粉的作用下紅細胞與粒細胞聚集并迅速沉降；此時，淋巴細胞及其他單個核細胞仍處于分離液上層，紅細胞污染可忽略不計。大部分血小板可在細胞清洗低速離心過程中去除。 其他人及動物多種比重細胞分離液，因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數(shù)及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。

適用于從動物抗凝血液中分離淋巴細胞，無菌條件下所分離的淋巴細胞可用于細胞培養(yǎng)等。本品僅供科研使用。

密度：1.0830±0.0001g/ml

本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

產(chǎn)品內(nèi)容：

各種動物外周血淋巴細胞分離液 200mL

全血及組織稀釋液 200mL

細胞洗滌液 200mL

保存：18℃-25℃保存，有效期兩年。本品易感染細菌，需無菌條件下操作。無菌條件下操作，啟封后常溫保存。如4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

操作步驟：

1. 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。

2. 在離心管中加入適量分離液（當稀釋后血液體積小于3mL時，加入3mL分離液；大于等于3mL，加入等體積分離液。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二，否則會影響分離效果），將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上，因為兩者的密度差異，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多加樣時間較長，在離心之前出現(xiàn)紅細胞成團下沉屬正常現(xiàn)象。）

3. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min（血液的體積越大所需的離心力越大，離心時間越長，的分離條件需摸索，離心轉(zhuǎn)速大不超過1200g）。

4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：上層是稀釋的血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細胞層，離心管底部是紅細胞與粒細胞。

5. 小心的吸取白膜層細胞到15mL潔凈的離心管中， 10mL PBS或細胞洗滌液洗滌白膜層細胞。250g，離心10min。

6. 棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心10min。

7. 重復步驟6

8. 棄上清，細胞重懸備用。

注意事項：

A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免微生物污染。。

B. 分離液使用時應始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會導致白膜層中紅細胞污染加重。 

C. 血液樣本為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)），為保持淋巴細胞的活性，應避免冷凍和冷藏。

D. 稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導致血細胞凝集，大大降低細胞得率及純度。

E. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導致細胞掛壁，影響分離效果。

F. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間，摸索

G. 吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數(shù)量增加；吸取過多的血漿層可能會導致淋巴細胞中血漿蛋白及血小板污染。

H. 如果要進一步對分離的細胞進行培養(yǎng)，那在收集血液和分離過程中，注意無菌操作，避免微生物污染。

I. 不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數(shù)及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。

Solarbio 大鼠外周血淋巴細胞分離液