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產品名稱:質粒小量提取試劑盒

產品型號:D1100

產品報價:

產品特點:質粒小量提取試劑盒
本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞,根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結合溶液中的DNA的原理特異性提取質粒DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質材料能高效、專一地吸附DNA,可限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。 使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測序、連接和轉化等試驗。

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D1100質粒小量提取試劑盒的詳細資料:

質粒小量提取試劑盒說明書
貨號:D1100
規(guī)格:50T/100T
保存:常溫保存,復檢期一年。
試劑盒內容

產品說明:
本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞,根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結合溶液中的DNA的原理特異性提取質粒DNA。離心吸附柱中采用的硅基質材料能高效、專一地吸附DNA,可大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測序、連接和轉化等試驗。
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標簽。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入),混勻,置于 2-8℃保存。如非指明,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

質粒小量提取試劑盒
操作步驟:

1、取1-5ml細菌培養(yǎng)物,12000rpm離心1min,盡量吸除上清(菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中)。
2、向留有菌體沉淀的離心管中加入250ul溶液Ⅰ(請先檢查是否已加入RNaseA),使用移液器或旋渦振蕩器*懸浮細菌細胞沉淀。注意:如果菌塊未*混勻,會影響裂解導致質粒提取量和純度偏低。
3、向離心管中加入250ul溶液Ⅱ,溫和地上下翻轉6-8次使菌體充分裂解。注意:混勻一定要溫和,以免污染細菌基因組DNA,此時菌液應變得清亮粘稠,作用時間不要超過5 min,以免質粒受到破壞。
4、向離心管中加入350ul溶液Ⅲ,立即溫和地上下翻轉6-8次,充分混勻,此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12000rpm離心10 min,用移液器小心地將上清轉移到另一個干凈的離心管中,盡量不要吸出沉淀。注意:溶液Ⅲ加入后應立即混合,避免產生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清。
5、將上一步所得上清液加入吸附柱中(吸附柱加入收集管中),室溫放置2min,12000rpm離心1min,倒掉收
集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入500ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm離心2min,將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR等。
9、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置2min,12000rpm離心1min。
10、為了增加質粒的回收效率,可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,室溫放置2min,12000rpm離心1min。


注意事項:
1. 使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn)象,可在37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復澄清后再使用。溶液Ⅱ 、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應立即擰緊蓋子。
2. 洗脫緩沖液體積不應少于50ul,體積過小影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌,若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調此范圍), pH值低于7. 0會降低洗脫效率, DNA產物應保存在-20℃,以防DNA降解。
3. 如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10kb的大質粒,應加大菌體使用量,使用5-10ml過ye培養(yǎng)物,同時按照比例增加溶液Ⅰ 、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量,吸附和洗脫時可以適當?shù)难娱L時間,以增加提取效率。
4. DNA濃度及純度檢測:得到的質粒DNA純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。 DNA應在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當于大約50ug/ml雙鏈DNA、 40ug/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應為1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響吸光值,但并不表示純度低。

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相關文獻:

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《Enhanced freeze tolerance of baker’s yeast by overexpressed trehalose-6-phosphate synthase gene (TPS1) and deleted trehalase genes in frozen dough》 作者:Haigang Tan,Jian Dong,Guanglu Wang,Haiyan Xu,Cuiying Zhang,Dongguang Xiao 期刊:Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 影響因子:2.533 PMID:24951963
《A two-step integration method for seamless gene deletion in baker’s yeast》 作者:Jian Dong,Guanglu Wang,Cuiying Zhang,Haigang Tan,Xi Sun,Mingyue Wu,Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影響因子:2.275 PMID:23597844
 

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